当前位置: 华文头条 > 健康

生物缓冲液Tris的优点及注意事项

2024-06-09健康

缓冲溶液是由弱酸及其盐或弱碱及其盐组成的混合溶液,能够在一定程度上抵抗外界加入的强酸或强碱的影响,从而保持溶液的pH值相对稳定。其在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义。下面我们就以Tris缓冲液为例,来谈谈Tris缓冲液的相关知识。

一.Tris缓冲液的优点

1.在水中溶解度高:在水中Tris缓冲液溶解度很高,在很多酶的反应中是惰性的。

2.应用范围广:Tris缓冲液适用于很多生物化学实验的需要,在化妆品、体外诊断、分子生物学及涂料等领域也有重要地位。

3.缓冲能力好:Tris缓冲液有较强的缓冲能力,一定范围内可维持溶液的pH稳定,通常在7.5-9之间。

4.对生物化学过程干扰小:不和钙、镁离子及重金属离子反应发生沉淀。

5、Tris缓冲液有比较强的碱性,在实验中可以用Tris缓冲液配制pH值由酸性到碱性范围的缓冲液。

Tris包装

二.使用Tris缓冲液时的注意事项:

1. 在实验过程中皮肤吸收接触Tris缓冲液会造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜。

2. Tris缓冲液易受光照、氧气和其他因素的影响因此在配置过程中要考虑使用场景。温度变化对缓冲液pH值的影响(△pKa/℃=-0.031)例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以要在规定温度下进行制备,在常温下制备的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃。其pH值受溶液的浓度影响大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1。因此Tris缓冲液在一些对pH值变化要求较高的实验中使用时,要更加注意这一点。

3. 二喹甲酸(BCA)测定中不可使用Tris缓冲液。

4. Tris在与各种分子反应中,包括RNA酶抑制剂,醛,酶,DNA以及常见金属如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,可以和重金属一起作用,但在有些系统中也起抑制作用。

5. Tris缓冲液含有铵基,可以与醛发生缩合反应,对某些生物体系具有一定的干扰作用。

三.Tris缓冲液的制备

要配置1升Tris缓冲液,将121.14 g Tris溶解在750 mL dH2O中。用浓盐酸调节至所需的pH。pH值可以通过增加Tris HCl(酸性增加)或Tris碱(碱性增加)的摩尔比来调节并使用Hendersen-Hasselbalch方程进行估算。用dH2O填充至终体积1L,并通过过滤器或高压釜灭菌。储存温度在4˚C。

Tris粉末

总的来说,Tris缓冲剂是一种常用的高效缓冲剂,广泛应用于生物化学、分子生物学和生物工程研究中。例如,在蛋白质的提取、分离和纯化过程中,需要使用一些具有稳定性和活性的缓冲液;在酶促反应过程中,需要使用一些具有适当pH值和离子强度的缓冲液,能够帮助实验者稳定pH值,保证实验准确性和可靠性。