作者 | 吳亮亮 黃偉
單位 | 廣東陽春市中醫院
PART.01
前 言
B肝五項檢查，又稱B肝兩對半，是血液中B肝病毒血清學標誌物。
乙型病毒性肝炎的五項指標：
①B肝表面抗原（HBsAg）
②B肝表面抗體（HBsAb）
③B肝e抗原（HBeAg）
④B肝e抗體（HBeAb）
⑤B肝核心抗體（HBcAb）
在臨床實踐中，B型肝炎病毒標誌物具有多重重要作用。它們不僅有助於診斷感染狀況、即時監測疾病進展，還能對慢性B型肝炎治療的應答情況進行評估，同時在臨床試驗中發揮關鍵作用，以衡量新型抗病毒藥物的療效。因此，B肝兩對半檢測結果顯得尤為重要。
PART.02
案例經過
在某個陽光明媚的日子，我這位勤勉的檢驗君正在發光崗位一絲不茍地稽核著結果。突然，我發現了一個奇怪的現象：B肝兩對半居然連續N個④、⑤陽性，而①②③卻都是陰性。這種情況雖然並非絕對不可能，但其機率恐怕堪比中彩票大獎。
面對這一異常情況，我迅速展開了調查。首先，我對儀器和樣本進行了仔細檢查，確認儀器無故障，樣本血清分離良好且無溶血和黃疸的跡象。但是，我發現儀器上顯示的受質液量僅為36,開啟儀器檢視，發現受質液的數量確實較少。因此，我推測這可能是由於受質液數量較少導致儀器抽吸效果不佳的結果。
為了查明真相，我立即更換了受質液並對儀器進行了清洗。隨後，我重新將標本放入儀器進行檢測。這一次，檢測結果與之前的大相徑庭。
最讓我放心的是：部份有歷史記錄的結果與往日相符。為了確保萬無一失，我還特意拿了2管沒有歷史記錄的樣本，在另外一台裝置上進行了檢測，結果相差無幾。
PART.03
案例分析
為什麽缺乏受質液，會導致①②③假陰性，④⑤假陽性？
這要從B肝兩對半的方法學說起。
我院采用化學發光法對B肝五項進行定量檢測，化學發光免疫分析法的原理基於將發光物質或酶標記於抗原或抗體上，使之能特異性地與待測物質交互作用。接著，加入氧化劑、化學發光受質或電壓來激發這些物質。
透過氧化劑的作用，發光物質被氧化至激發態；而酶則催化發光受質在電壓的激發下轉化為高能激發態。由於激發態不穩定，物質會回到基態並以光的形式釋放能量。此外，在一定條件下，待測物濃度和發光強度呈線性關系，檢測光的強度就可以確定待測物的含量。
B肝兩對半具體的檢測原理如下:
①表面抗原(HBsAg):
本產品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBs抗體包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記的抗-HBs抗體制備酶結合物。透過免疫反應形成抗體-抗原-抗體-酶復合物，該復合物催化發光受質發出光子，發光強度與HBsAg含量成正比。
②表面抗體（HBsAb/抗-HBs）:
本產品采用雙抗原夾心法原理進行檢測。用表面抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記表面抗原制備酶結合物。透過免疫反應形成抗原抗體-酶標抗原復合物， 該復合物催化發光受質發出光子，發光強度與表面抗體的含量成正比。
③B型肝炎病毒e抗原( HBeAg)：
本產品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBe制備磁微粒，辣根過氧化物酶標記抗-HBe制備酶結合物。透過免疫反應形成抗體-抗原一酶標抗體復合物，該復合物催化發光受質液發出光子，發光強度與HBeAg的含量成正比。
④B肝e抗體（HBeAb/Anti-HBe）：
本產品采用競爭法原理進行檢測。用Anti-HBe和HBeAg包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記Anti- -HBe制備酶結合物。透過免疫反應形成抗體-抗原酶標抗體復合物，該復合物催化發光受質發出光子，發光強度與Anti-HBe的含量成反比。
⑤B肝核心抗體（HBcAb/抗-HBc）
本產品采用競爭法原理進行檢測。用Anti-HBe和HBeAg包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記Anti-HBe制備酶結合物。透過免疫反應形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，該復合物催化發光受質發出光子，發光強度與Anti-HBe的含量成反比。
簡單點來說就是在B肝兩對半中：
①②③發光強度與含量成正比，故缺乏受質液，檢測到的含量均偏低，結果均陰性。
④⑤發光強度與含量成反比，，故缺乏受質液，檢測到的含量均偏高，結果均陽性。
PART.04
知識拓展
HBsAg(B肝表面抗原）：HBsAg陽性表明患者感染了B型肝炎病毒(HBV),通常在感染後的1至12周內出現。急性感染者的癥狀永續5周至5個月，而如果陽性持續超過6個月，則被視為慢性感染。對於慢性B型肝炎(CHB)和無癥狀攜帶者來說，病情可能持續多年，甚至終身不愈。
HBsAb(B肝表面抗體）：抗-HBs,一種保護性抗體，其濃度在10 mIU/ml以上，預示著個體已經具備了強大的免疫能力。透過接種疫苗而產生的抗-HBs,對於人群的免疫保護能夠持續超過三十年的時間，因此，一般情況下，普通人群無需進行加強針的接種。
HBeAg(B肝e抗原)：HBeAg,作為HBV病毒復制的關鍵指標，其在HBV感染後的顯現時間稍晚於HBsAg。值得註意的是，HBeAg與HBV DNA之間存在著密切的關聯性。一旦此項檢測結果呈陽性，意味著病毒復制活動正處於高度活躍狀態，且傳染性亦較強。
HBeAb(B肝e抗體）：抗-HBe在HBeAg轉陰後出現，預示著HBV的復制活動減弱以及傳染性下降。
HBcAb(B肝核心抗體)：抗-HBc IgM在HBsAg陽性後2~4周出現，為HBV急性感染及慢性感染病情活動的標誌。抗-HBc IgG出現較遲，但長期存在甚至終身維持陽性，是現癥或既往感染的標誌。
本案例中批次出現了①②③陰性，④⑤陽性。
HBsAg（-）
HBsAb（-）
HBeAg（-）
HBeAb（+）
HBcAb（+）
B肝兩對半HBeAb、HBcAb陽性。表明患者為既往感染，處於急性B型肝炎恢復期，基本無傳染性（少數仍有傳染性）。
PART.05
案例總結
在本案例中，批次檢測結果顯示兩對半的①②③陰性，④⑤陽性，原因是受質液不足導致的。盡管儀器上的受質液仍顯示有36人份的受質液，但其數量有限，導致儀器抽吸效果不佳，從而產生錯誤的檢測結果。
筆者曾向多位發光工程師請教，建議在受質液量剩余20、30或40時進行更換或者讓儀器自動切換的均有，無法達成統一意見。在實際工作中，若遇到儀器顯示受質液較少的情況，我們必須開啟儀器，觀察受質液的實際情況，保持高度警覺，以免重蹈覆轍，引發類似的故障。
PART.06
專家點評
廣東陽春市中醫院檢驗科主任（副主任技師）：林協
在許多人的心目中，檢驗科人員的工作僅僅是將樣本送入儀器，等待結果呈現即可。然而，實際上，檢驗人員的職責遠不止如此。當面對異常特殊的檢驗成果時，我們必須具備敏銳的分析能力，深入挖掘問題根源，從而找到解決問題的途徑，這樣才能發出準確無誤的報告。
參考文獻
[1]中華醫學會肝病學分會基礎醫學與實驗診斷協作組.B型肝炎病毒標誌物臨床套用專家共識[J] . 中華肝臟病雜誌, 2023, 31(4) : 389-400.
[2]臨床醫學檢驗技術核心考點全攻略，程旭，2021.5
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編輯：徐少卿 審校：陳雪禮
