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生物緩沖液Tris的優點及註意事項

2024-06-09健康

緩沖溶液是由弱酸及其鹽或弱堿及其鹽組成的混合溶液,能夠在一定程度上抵抗外界加入的強酸或強堿的影響,從而保持溶液的pH值相對穩定。其在生物化學的研究工作中有著極為重要的意義。下面我們就以Tris緩沖液為例,來談談Tris緩沖液的相關知識。

一.Tris緩沖液的優點

1.在水中溶解度高:在水中Tris緩沖液溶解度很高,在很多酶的反應中是惰性的。

2.套用範圍廣:Tris緩沖液適用於很多生物化學實驗的需要,在化妝品、體外診斷、分子生物學及塗料等領域也有重要地位。

3.緩沖能力好:Tris緩沖液有較強的緩沖能力,一定範圍內可維持溶液的pH穩定,通常在7.5-9之間。

4.對生物化學過程幹擾小:不和鈣、鎂離子及重金屬離子反應發生沈澱。

5、Tris緩沖液有比較強的堿性,在實驗中可以用Tris緩沖液配制pH值由酸性到堿性範圍的緩沖液。

Tris包裝

二.使用Tris緩沖液時的註意事項:

1. 在實驗過程中皮膚吸收接觸Tris緩沖液會造成傷害,操作時需戴好手套和護目鏡。

2. Tris緩沖液易受光照、氧氣和其他因素的影響因此在配置過程中要考慮使用場景。溫度變化對緩沖液pH值的影響(△pKa/℃=-0.031)例如:4℃時緩沖液的pH=8.4,則37℃時的pH=7.4,所以要在規定溫度下進行制備,在常溫下制備的Tris-HCl緩沖液不能用於0℃~4℃。其pH值受溶液的濃度影響大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大於0.1。因此Tris緩沖液在一些對pH值變化要求較高的實驗中使用時,要更加註意這一點。

3. 二喹甲酸(BCA)測定中不可使用Tris緩沖液。

4. Tris在與各種分子反應中,包括RNA酶抑制劑,醛,酶,DNA以及常見金屬如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,可以和重金屬一起作用,但在有些系統中也起抑制作用。

5. Tris緩沖液含有銨基,可以與醛發生縮合反應,對某些生物體系具有一定的幹擾作用。

三.Tris緩沖液的制備

要配置1升Tris緩沖液,將121.14 g Tris溶解在750 mL dH2O中。用濃鹽酸調節至所需的pH。pH值可以透過增加Tris HCl(酸性增加)或Tris堿(堿性增加)的莫耳比來調節並使用Hendersen-Hasselbalch方程式進行估算。用dH2O填充至終體積1L,並透過過濾器或高壓釜滅菌。儲存溫度在4˚C。

Tris粉末

總的來說,Tris緩沖劑是一種常用的高效緩沖劑,廣泛套用於生物化學、分子生物學和生物工程研究中。例如,在蛋白質的提取、分離和純化過程中,需要使用一些具有穩定性和活性的緩沖液;在酶促反應過程中,需要使用一些具有適當pH值和離子強度的緩沖液,能夠幫助實驗者穩定pH值,保證實驗準確性和可靠性。